不同剂量重组腺病毒HIF-1α对兔缺血后肢血管新生和通透性的影响

摘要

目的探讨不同剂量重组腺病毒低氧诱导因子-1α(Adenovirus mediated hypoxia-inducible factor-1α,Ad-HIF-1α)对兔缺血后肢的促血管新生作用和对新生血管通透性的影响。方法 (1)Ad-HIF-1α在HEK293A细胞内大量扩增,透析纯化,PCR及基因测序鉴定,终点稀释法测定病毒滴度。(2)20只新西兰大白兔高位结扎、离断左侧股动脉及其分支建立急性后肢缺血模型,随机分为4组,每组5只,分别以Ad-HIF-1α1.0×10^(10) Pfu(低剂量组)、1.0×10^(11) Pfu(中剂量组)、1.0×10^(12) Pfu(高剂量组)和生理盐水0.5 ml(NS对照组))肌注术肢骨骼肌。术后28天伊文思兰法检测左侧后肢局部新生血管通透性并处死动物取左侧后肢内收肌行病理切片CD31免疫组化微血管密度(microvasculardensity,MVD)计数检查。结果转染后28天CD31免疫组化结果显示低、中、高剂量组及NS组MVD分另别为(114.40±4.83)num/mm^2、(139.60±4.16)num/mm^2、(175.40±6.69)num/mm^2及(80.40±6.66)num/mm^2,提示随剂量增加MVD计数增加,各组间对比有统计学意义(F=248.308,P=0.000);伊文思兰法检测4组新生血管通透性相似,低、中、高剂量组及NS组伊文思兰浓度分别为(7.25±0.83)μg/mL、(7.23±0.69)μg/mL、(7.22±0.63)μg/mL及(7.12±0.48)μg/mL,各组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Ad-HIF-1α转基因治疗能促进兔缺血后肢血管新生且呈正相关量-效关系;新生血管通透性接近生理状态。