小鼠24p3基因真核表达载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达

摘要

目的构建小鼠24p3基因真核表达载体并观察其稳定转染的NIH3T3细胞中24p3/SIP24蛋白的表达情况,初步鉴定24p3/SIP24蛋白介导铁向细胞内转运的生物学功能。方法RT-PCR自小鼠肺组织中克隆24p3 cDNA。用基因重组技术构建24p3-pcDNA3.0真核表达载体并行酶切和测序鉴定。脂质体DOTAP方法转染NIH3T3细胞,48 h后用G418筛选阳性克隆并培养扩增至21 d。对阳性克隆的培养基上清中24p3/SIP24蛋白的表达用ELISA和W esternb lot分析,进一步用原子吸收分光光谱观察其介导铁向NIH3T3细胞内转运的生物学功能。结果成功克隆24p3 cDNA并构建24p3-pcDNA3.0真核表达载体,筛选出稳定表达24p3/SIP24蛋白的NIH3T3细胞株,24p3/SIP24蛋白在NIH3T3细胞上清中获得表达,并能介导铁向NIH3T3细胞内转运。结论24p3基因在NIH3T3细胞中获得表达,有良好的生物学活性,为进一步研究24p3/SIP24蛋白介导铁转运的生物学功能及作用机制奠定了基础。