成肌细胞表达异源心钠素基因的研究

摘要

目的研究成肌细胞表达异源心钠素(atrialnatriureticfactor,ANF)基因的可行性,为其在心血管疾病中的应用提供依据。方法以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人的心钠素基因,将其与质粒pcDNA3.0连接,构建质粒pcDNA3.0/ANF。将pcDNA3.0/ANF及对照pcDNA3.0分别转染体外培养的大鼠骨骼肌成肌细胞,筛选以获得稳定表达异源心钠素基因的细胞。收集筛选后的细胞培养基以放射免疫分析法检测心钠素的表达水平,第14d以定量PCR的方法检测成肌细胞内心钠素mRNA的水平。结果pcDNA3.0/ANF组重组心钠素的表达水平为174.19±52.43pg/ml,成肌细胞内mRNA含量(灰度值)为254.62±10.86,与对照组比较均有显著性差异,P<0.01。结论成肌细胞可以表达异源心钠素基因,这一方法有可能应用于心血管疾病的基因治疗。