人铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆表达及活性鉴定

摘要

目的获得高表达人铜锌超氧化物歧化酶(hCu/Zn-SOD)的工程菌。方法采用RT-PCR技术从人胃组织总RNA中分离扩增了hCu/Zn-SOD的cDNA序列,将该基因重组到T7启动子控制下的分泌型表达载体pET22b(+)中,构建了表达质粒pETSOD,并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。采用SDS-PAGE、蛋白质免疫印迹分析其活性。结果该工程菌可高表达一相对分子质量大约16kD的蛋白,与抗人Cu/Zn-SOD多克隆抗体有特异的免疫反应,表达量可达菌体可溶性蛋白的20%以上,且具有特异性SOD酶活性。结论该菌株分泌表达了有天然酶活性的hCu/Zn-SOD,为大量制备hCu/Zn-SOD和下一步研究工作奠定了基础。