柱前衍生化-反相高效液相色谱法测定蛋白粉中氨基酸的含量

摘要

目的：建立柱前衍生化-反相高效液相色谱方法测定蛋白粉中氨基酸的含量。方法：用6 mol/L HCl水解提取蛋白粉中总氨基酸,以异硫氰酸苯酯（PITC）为柱前衍生化试剂,采用外标法,梯度洗脱的方式分析。色谱柱为ODS（Kromasil 100-5 C18250×4.6 mm）,采用两种流动相进行梯度洗脱：流动相A为0.1 mol/L醋酸钠缓冲液（pH6.5）-乙腈（97：3）;流动相B为水-乙腈（1：4）,使用紫外检测器,检测波长为254 nm。结果：17种氨基酸在40 min内均可得到很好的分离;在10～200μg/ml的浓度范围内呈良好的线性关系（r=0.9991-0.9999）;平均回收率为89.1%～98.2%;相对标准偏差为0.36%～1.24%。结论：本方法分离效果好、灵敏、准确,可广泛用于含有多种氨基酸样品的分析。