Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达鼠IL-4受体拮抗体蛋白的研究

摘要

目的利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达鼠IL-4受体拮抗体(mIL-4RA)蛋白。方法PCR方法扩增小鼠IL-4C118截断型基因,定向克隆入转移质粒pFastBacHTB中,转化感受态DH10Bac细胞,在DH10Bac细胞内重组pFastBacHTB与杆粒发生转座。筛选阳性克隆,提取重组杆粒,转染sf9昆虫细胞株,获取完整重组杆状病毒。反复感染sf9细胞,扩增病毒同时表达目的蛋白;用ELISA方法进行蛋白鉴定并初步定量。结果经核苷酸序列测定及PCR方法,鉴定成功获得含mIL-4RA基因的重组杆粒;通过杆粒转染后sf9细胞所表现出来的细胞病变,推断成功转染并获得重组杆状病毒;最后ELISA方法初步定量sf9细胞培养上清中mIL-4RA蛋白表达量为(1.15±0.12)ng/mL。结论本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功表达mIL-4RA蛋白,为进一步研究其生物学活性及功能奠定了实验基础,同时亦为其他蛋白质的真核表达提供了方法学的参考。