体外诱导犬骨髓间充质干细胞向上皮样细胞分化的初步研究

摘要

目的:探讨体外诱导犬骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向上皮样细胞分化的可行性和基本条件。方法:抽取成年健康杂种犬的骨髓,用密度梯度离心及贴壁培养法分离纯化BMSCs,培养扩增后,取第2代BMSCs在以下不同培养液中诱导培养:K-SFM+EGF+BPE、DMEM+EGF、K-SFM+BPE、DMEM+FBS,观察细胞形态的变化,绘制细胞的生长曲线,诱导培养后第7、14天,用免疫细胞化学染色和流式细胞仪鉴定上皮细胞特异性标志物细胞角蛋白(cytokeratin,CK)和上皮膜抗原(epithelial membrane antigen,EMA)的表达。结果:K-SFM+EGF+BPE组诱导培养第7天,少量细胞形态变为圆形或椭圆形,有突起,第14天圆形或椭圆形细胞明显增多;诱导培养过程中DMEM+EGF、K-SFM+BPE、DMEM+FBS组细胞形态无明显变化。CK免疫细胞化学染色结果提示:K-SFM+EGF+BPE组诱导培养第7天,少量细胞呈阳性表达,第14天,阳性细胞明显增多;DMEM+EGF、K-SFM+BPE、DMEM+FBS组细胞均呈阴性表达。流式细胞仪检测发现K-SFM+EGF+BPE组诱导培养第14天,部分细胞CK和EMA呈阳性表达(>7%),DMEM+EGF、K-SFM+BPE、DMEM+FBS组细胞均为阴性。结论:本实验提示K-SFM+EGF+BPE联合培养液能够在体外诱导犬BMSCs向上皮样细胞分化。