三阴性乳腺癌MDA-MB-231顺铂耐药细胞株的建立及鉴定

摘要

目的建立人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231顺铂（DDP）耐药细胞株,并对其耐药机制进行初步分析。方法采用逐步增加顺铂浓度、间歇诱导的方法,建立人三阴性乳腺癌MDA-MB-231/DDP体外耐药细胞模型;MTT法检测MDA-MB-231/DDP的耐药特性;高效液相色谱法检测耐药细胞内DDP药物浓度的改变;实时荧光定量PCR法分析两种细胞耐药相关基因MDR1、BCRP、MMP7及GST-π表达差异。结果 MTT显示MDA-MB-231/DDP的顺铂、5-氟尿嘧啶及环磷酰胺的耐药指数分别为9.80、4.43及2.21;高效液相检测显示2种细胞分别与6μg/ml的DDP接触24 h后,MDA-MB-231细胞内DDP的浓度为（47.10±2.37）ng/（5×10~4）cells,而MDA-MB-231/DDP细胞则为（6.30±1.64）ng/（5×10~4）cells（P〈0.01）;MDA-MB-231/DDP细胞中MDR1、BCRP、MMP7及GST-π基因m RNA的表达量分别是亲本细胞的15.39、13.73、22.52及44.90倍（P〈0.01）。结论逐步增加浓度、间歇诱导的方法建立了稳定、耐药性较高的MDA-MB-231/DDP细胞株,其耐药机制可能与ABC转运蛋白表达增加等多种机制相关。