siRNA干扰NBS1基因表达联合顺铂对三阴性乳腺癌细胞MDa-MB-231增殖、凋亡和周期的影响

摘要

目的：探讨siRNA敲低NBS1基因表达联合顺铂对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡和周期的影响。
　　方法：收集长海医院和瑞金医院2001年至2011年间收治的乳腺癌患者，共收集乳腺癌标本138例、正常癌旁乳腺组织97例，制作成组织芯片后，使用免疫组化方法明确NBS1蛋白在乳腺癌组织和癌旁正常组织中的表达情况。使用卡方检验比较乳腺癌组织组与癌旁组织组中NBS1蛋白阳性表达的比例。通过构建NBS1干扰质粒和阴性空载质粒，并通过腺病毒载体感染三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞，蛋白印迹法明确NBS1基因表达受抑制情况;CCK-8法检测干扰NBS1表达后顺铂对MDA-MB-231细胞体外增殖能力的影响;流式细胞法检测感染后实验组和阴性对照组MDA-MB-231细胞的凋亡和周期情况。
　　结果：免疫组化结果显示，乳腺癌组织组和癌旁正常组织组的NBS1表达的阳性率分别是80.43％和15.46％，乳腺癌组织中NBS1的阳性表达率明显高于癌旁组织，经卡方检验p＜0.05，两者阳性率差异有统计学意义。蛋白印迹法检测结果表明实验组NBS1蛋白表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05);CCK-8实验结果提示，同时在顺铂的作用下，与阴性对照组和空白对照组相比，实验组细胞增殖能力明显受到抑制(P＜0.05);流式细胞仪检测结果显示，实验组联合顺铂与阴性对照组联合顺铂相比凋亡率上升(P＜0.05);流式细胞仪测定周期结果显示实验组联合顺铂乳腺癌细胞出现G1期蓄积以及细胞进入M期和G2期发生阻滞。
　　结论：敲低NBS1基因的表达可以抑制三阴性乳腺癌细胞增殖，并促进癌细胞的凋亡。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一部分 NBS1基因在乳腺癌组织和细胞中的表达、NBS1-siRNA载体构建和筛选

材料及方法

实验结果

讨论

第二部分 干扰NBS1基因表达联合顺铂对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡和周期的影响

材料与方法

实验结果

讨论

参考文献

全文总结

综述 p16基因与乳腺癌关系的研究进展

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