呼吸道合胞病毒融合蛋白第168～289氨基酸片段的表达与纯化

摘要

目的：利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统表达RSV融合蛋白中主要抗原性区域的片段（第168～289氨基酸）并纯化重组蛋白。方法：在人胚肺二倍体细胞2BS株上培养RSV Long株,从培养物中提取病毒总核酸。采用RT-PCR法从RSV基因组RNA中扩增出F基因546-881 bp片段（F′）,F′插入到转移载体质粒pBacPAK9中再与线性杆状病毒BacPAK6 DNA（Bsu36I digested）共转染Sf9昆虫细胞。重组蛋白经镍离子柱螯合亲和层析纯化。经SDS-PAGE和West-ern-Blot鉴定重组蛋白。结果：外源基因在昆虫细胞中获得了表达,并通过其所带的信号肽分泌到了无血清培养基中。表达产物的分子量约为15×10^3,与理论值相符。结论：成功地用昆虫细胞表达系统表达了能分泌到培养基中的呼吸道合胞病毒F基因546-881 bp片段编码的融合蛋白第168～289氨基酸片段。