共生细菌SB_1降解聚乙烯醇的研究Ⅱ．共生细菌SB_1聚乙烯醇氧化酶的产生、纯

摘要

共生细菌ＳＢ＿１接种在０．３％聚乙烯醇（ＰＶＡ）培养基中，３０℃摇床振荡培养（５００ｍＬ三角瓶）或发酵罐（１０００Ｌ）通气培养时，ＰＶＡ氧化酶产生的高峰在４８ｈ或４０ｈ．离心收集的上清液采用４０％－５０％饱和度的硫酸铵分级沉淀ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ离子交换柱和Ｃｉｂａｃｒｏｎ蓝－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和柱层析等纯化步骤，ＰＶＡ氧化酶收得率３０％，比活力提高３１倍，该酶经凝胶电泳后，用硝基四氮唑蓝进行活性染色，呈现四条谱带，ＰＶＡ氧化酶与ＰＶＡ作用，可释放Ｈ＿２Ｏ＿２，同时伴随着粘度降低，ＰＶＡ氧化酶反应的最适ｐＨ为７．０，最适温度为４０℃，该酶置－５℃贮存较稳定，贮存５００天，其活力仍保留近５０％，在所测试的金属离子和化学试剂中，Ｐｂ￣（２＋）和水杨酸可使ＰＶＡ氧化酶活力完全丧失。而Ｂａ￣（２＋）与ＮａＮ＿３则对酶活力有较强的激活作用。