HBV preS1反基因锁核酸的设计及体外对病毒复制的抑制

摘要

目的:探讨针对乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)preS1 dsDNA同聚嘌呤区设计反基因锁核酸分子,并观察其在HepG2 2.2.15细胞内抑制病毒复制的效果.方法:针对HBVpreS1 dsDNA的2941-2962 nt、3 015-3 036 nt和3 089-3 110 nt三个同聚嘌呤区,利用RNA structure软件分别设计合成锁核酸、硫代寡核苷酸、未修饰寡核苷酸及无关对照序列,以阳离子脂质体介导转染HepG22.2.15细胞,采用荧光定量聚合酶链反应技术(FQ-PCR)和时间分辨免疫荧光技术(TRFIA)分别监测1、3、5和7 d细胞培养上清液中HBV DNA和HBsAg的含量;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测锁核酸对细胞代谢的影响.结果:反基因锁核酸对细胞内的HBV DNA复制与HBsAg表达有明显的抑制作用,且抑制率随时间呈增高趋势,7 d后抑制率分别为64.32%和67.51%.各实验组与对照组比较差异均具有统计学意义(均P<0.05),而封闭2 941-2 962 nt同聚嘌呤靶区的LNA抑制作用最强,且最适序列长度为20-30 bp.LNA对细胞代谢无明显影响.结论:针对preS1 dsDNA同聚嘌呤区的反基因锁核酸分子,体外能有效抑制HBV的复制,以封闭2 941-2 962 nt靶位效果最强,且合适序列长度为20-30 bp.