基因转移人TGF-β_1在NIH/3T3细胞中表达鉴定

摘要

目的 :基因转移人转化生长因子β1(TGF β1)在真核细胞系中蛋白表达。方法 :借助真核质粒表达载体 ,将人TGF β1 转移入小鼠成纤维细胞株(NIH/3T3)细胞中 ,经G418筛选 ,克隆扩增 ,Southernblot、Northernblot、PCR、RT PCR鉴定 ,并经水貂肺上皮细胞(CCL 64)生长抑制法 ,对克隆细胞分泌TGF β1 蛋白进行活性检测。结果 :证实了重组人TGF β1 基因在NIH/3T3细胞基因组中的稳定重组和mRNA水平的表达 ,TGF β1 蛋白活性检测及流式细胞仪免疫荧光测定结果 ,均证实了克隆细胞表达并分泌TGF β1 蛋白。结论 :通过基因转移方法成功地在NIH/3T3细胞中重组并表达人TGF β1 蛋白 ,PCR结果还提示NIH/3T3细胞系基因组中无人TGF β1 序列存在。