报春PF sHSP21.4基因转化拟南芥的获得及耐热鉴定

摘要

根据灰岩皱叶报春PF sHSP21.4热激蛋白基因序列,采用PCR法从差减文库中克隆得到该基因并构建pCAMBIA1301-PF sHSP21.4植物表达载体,通过根癌农杆菌介导的花器浸染法转化拟南芥,经潮霉素筛选、PCR和RT-PCR法鉴定后,对转基因植株和野生型对照进行高温胁迫,分析其耐热性差异。结果显示:在43℃或44℃处理下,转基因拟南芥幼苗的存活率明显高于野生型拟南芥,且高温处理后转基因植株叶片的相对电导率升高的幅度显著低于野生型对照,Fv/Fm值比野生型拟南芥下降幅度较小,可溶性蛋白的含量在热胁迫下有轻微上升,而野生型拟南芥的可溶性蛋白含量则随胁迫的加剧而显著降低。实验证明,PF sHSP21.4基因对植物的耐热性有重要作用。