克隆乙型肝炎病毒DNA在肝与肾细胞中复制与表达的研究

摘要

目的　对比研究在体外细胞培养系统中乙型肝炎病毒（ Ｈ Ｂ Ｖ） 在肝、肾细胞中的复制与表达。方法　用克隆 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ（ｐ１７７ 、ｐ３ ．８ Ⅱ、ｐ Ｃ Ｍ Ｖ３ ．９） 分别转染 Ｈｅｐ Ｇ２ 与２９３ 细胞系；ｐ１７７ 与ｐ３ ．８ Ⅱ还转染了原代人胚肾细胞。培养后收集转染细胞培养上清液，用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法检测 Ｈ Ｂｓ Ａｇ 与 Ｈ Ｂｅ Ａｇ ；提取转染细胞的 Ｄ Ｎ Ａ 与 Ｒ Ｎ Ａ，进行 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 与 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交检测细胞内 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 与 Ｈ Ｂ Ｖ Ｒ Ｎ Ａ。结果　转染 Ｈｅｐ Ｇ２ 细胞， Ｈ Ｂｓ Ａｇ 与 Ｈ Ｂｅ Ａｇ 均有高水平表达； Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 与 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交显示特异的 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 与 Ｈ Ｂ Ｖ Ｒ Ｎ Ａ 杂交信号。而转染２９３ 细胞后， Ｈ Ｂｓ Ａｇ 与 Ｈ Ｂｅ Ａｇ 仅出现很低水平表达； Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 和 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交除ｐ Ｃ Ｍ Ｖ３ ．９ 转染细胞出现明显的 Ｈ Ｂ Ｖ 特异杂交信号外，其他为阴性或微弱阳性。转染原代人胚肾细胞均无 Ｈ Ｂｓ Ａｇ 与 Ｈ Ｂｅ Ａｇ 表达。结论　 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 在肝细胞中可以复制与表达，在肾细胞中仅有低水平的病毒抗原表达而无复制，只?