结球甘蓝抗TuMV相关基因的克隆

摘要

以结球甘蓝高抗TuMV自交不亲和系 84 0 75为材料 ,构建了cDNA文库。根据抗病基因保守序列 (NBS LRR)设计一对简并引物 ,以 84 0 75的基因组DNA和cDNA为模板 ,进行PCR扩增 ,分别扩增出一条 5 13bp片段 ,对扩增片段进行了克隆测序。选取两个与抗病基因同源性较高的克隆片段作探针 (命名Bor1,Bor2 ) ,对构建的cDNA文库进行筛选 ,得到一个阳性克隆 (命名TuR2 )。测序及序列分析表明 ,该基因总长为 76 2bp ,编码 2 2 6个氨基酸 ,包含 6 81bp的开放阅读框 ,与已克隆的抗病基因有不同程度的同源性。利用TuR2作探针 ,进行了Southern杂交、Northern杂交以及抗病性的共分离检测分析。结果表明 ,TuR2可能以单拷贝形式存在 ,其表达是组成型的 ,且无组织特异性 ;