免疫沉淀——质谱联用揭示RCC2在乳腺癌MDA-MB-468细胞系中的新功能

摘要

目的分析RCC2蛋白在乳腺癌MDA-MB-468细胞系中的互作蛋白组并揭示其功能调控网络。方法运用酶切技术结合一代测序构建携带Flag标签RCC2蛋白过表达载体,慢病毒包装感染构建Flag-RCC2过表达的MDA-MB-468稳转细胞株。采用Flag抗体凝胶珠亲和沉淀,收集蛋白样品进行高敏感度质谱鉴定。生物信息蛋白组学分析互作蛋白组,包括GO注释,KEGG通路富集,构建蛋白互作网络(PPIN)。结果高可信度164个蛋白聚类分析显示,RCC2及其互作蛋白显著富于核糖体相关通路中,具有RNA与核蛋白体结合能力,揭示其参与蛋白翻译与成熟的过程。结论成功鉴定RCC2互作蛋白组,揭示RCC2在乳腺癌细胞中发挥新的翻译调控功能。