一种适用于RT-PCR的拮抗酵母菌总RNA提取方法

摘要

为了探索提取拮抗膜醭毕赤酵母(Pichia membrane faciens)总RNA的理想方法,以拮抗膜醭毕赤酵母(Pichia membrane faciens)菌株为实验材料,用改良的SDS法、Trizol试剂法和十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法分别对其进行了总RNA的提取,并利用紫外分光光度计法、凝胶电泳法和反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chainreaction,RT-PCR)比较3种不同提取方法获得的总RNA质量和产率。结果表明:改良SDS法提取的总RNA具有较高的质量,OD260/OD280比值为1.980,并且OD260/OD230为2.054。凝胶电泳结果表明,改良的SDS法有28SrRNA、18SrRNA和5SrRNA3条清晰的条带,且很少降解,28SrRNA与18SrRNA亮度比约为2:1;RT-PCR能清楚扩增到特异条带,进一步证实了改良的SDS法提取拮抗酵母膜醭毕赤菌株的总RNA质量最好;CTAB法获得的总RNA质量也较好,只是28SrRNA与18SrRNA亮度比差异不明显;Trizol试剂法提取的RNA质量最差,RNA降解多,总RNA不完整,并有DNA污染。