Asia1型口蹄疫病毒多表位基因的设计及其在毕赤酵母中的表达

摘要

为制备Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)特异性诊断抗原,根据国内Asia 1型FMDV流行毒株的序列,合成了2个FMDV流行毒株VP1基因的5个抗原表位。采用InsightⅡ软件进行蛋白空间构象模拟,证实设计的多表位分子结构符合要求。将合成的多表位基因按设计的酶切位点进行酶切连接,构建了Asia 1型FMDV VP1双拷贝基因重组质粒(pMD18-dVP1 Asia)。从该重组质粒获得dVP1 Asia基因,与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,构建了重组表达质粒pPIC9K-dVP1 Asia。用BglⅡ将重组表达质粒线性化后,转化GS115酵母菌。经筛选、鉴定,成功获得了表达FMDV多表位VP1蛋白的阳性重组酵母菌。该阳性重组酵母菌经甲醇诱导,在培养液上清中可检测到目的蛋白。Western-blot结果显示,该蛋白能特异识别Asia 1型FMDV抗体,且具有很好的反应原性。