应用RNA干扰技术体外抑制脂蛋白脂肪酶基因的表达

摘要

目的　给探讨脂蛋白脂肪酶基因作为动脉粥样硬化基因治疗靶点提供实验基础。方法　利用RNA干扰技术在细胞水平抑制脂蛋白脂肪酶基因的表达 ,根据人脂蛋白脂肪酶基因设计靶序列短发夹RNA ,构建重组干扰质粒pSIREN DNR shRNA ,将干扰质粒与人脂蛋白脂肪酶真核表达质粒 pCDNA3 hLPL以脂质体方法共转染COS 7细胞 ,通过实时荧光定量聚合酶链反应、Westernblot和活性检测等方法判断脂蛋白脂肪酶基因抑制的效果。结果　转染干扰质粒的细胞中脂蛋白脂肪酶mRNA、蛋白表达以及酶活性均明显降低 ,抑制率可达 70 %以上。结论　所选靶序列可以有效抑制细胞中脂蛋白脂肪酶基因的表达 。