ret基因体外定点突变及其突变效应分析

摘要

目的体外完成ret基因cDNA2753处T→C定点突变,并理论分析突变后效应。方法采用PCR诱导突变完成ret体外定点突变;利用OMIGA2.0蛋白分析软件,通过分析突变前后ret基因cDNA序列变化,预测RET蛋白构象、结构域及理化性质改变。结果PCR筛选突变序列最佳复性温度为61℃;DNA序列分析提示ret基因cDNA2753处碱基由T变为C;软件分析后发现,点突变导致相应位置处蛋白质二级结构折叠方向改变,且增添一个新的磷酸化位点。结论ret基因体外定点突变完成;cDNA2753处T→C单点突变可能是MEN2B发生的分子机制。