一步法RT-PCR和两步法RT-PCR对马铃薯病毒诊断研究的比较

摘要

为建立快速、简便、灵敏度高、特异性强的RT-PCR检测马铃薯病毒技术,采用试剂盒和Total试剂2种方法,从马铃薯叶片和茎秆中提取马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、马铃薯S病毒、马铃薯A病毒以及马铃薯卷叶病毒的RNA。设计了5种马铃薯病毒引物,同时应用一步法RT-PCR和两步法RT-PCR的反应体系对5种病毒扩增,分别得到620bp(PVX)、550bp(PVY)、435bp(PVS)、300bp(PVA)和222bp(PLRV)的扩增片段。将结果与报道的这5种马铃薯病毒核苷酸序列进行BLAST比对,表明扩增的5种马铃薯病毒靶带的序列与靶序列完全一致。2种诊断方法对马铃薯病毒核酸进行浓度检测,结果证明,两步法RT-PCR具有较高灵敏性。但这2种方法均可快速、简便、有效地诊断马铃薯病毒。