利用电转化和三亲杂交方法高效转化根癌农杆菌

摘要

目的探索根癌农杆菌的高效转化方法。方法考察质粒经电击转化法转化根癌农杆菌 (A grobacteriumtumefaciensLBA440 4)的影响因素 ,并优化其转化条件 ;研究采用三亲杂交方法 ,将带有vgb基因簇的重组质粒 pYG3 0 8导入A .tumefaciensLBA440 4;经PCR扩增反应进行验证。 结果外加电场强度和脉冲时间是决定电转化效率的关键因素 ,两者适当组合才可获得高转化效率 ;采用对数期中期的细菌和提高细菌浓度均可提高转化效率。用三亲杂交方法转化A .tumefaciensLBA440 4,可得到较高的转化效率。所获抗性转化子的质粒DNA酶切图谱正确。结论带有双元载体 (含vgb基因 )