中华眼镜蛇心脏毒素(CardiotoxinⅢ)的克隆及其在大肠杆菌和酵母中的表达(英文)

摘要

心脏毒素cardiotoxinⅢ(CTXⅢ)是中华眼镜蛇毒主要组分之一,根据Genbank中已有的CTXs序列设计特异性引物,从中华眼镜蛇毒中克隆出208bp的CTXⅢ片段,并将该基因片段分别克隆至大肠杆菌His-patch ThioredoxinB载体中,重组CTXⅢ经渗透休克分泌至胞外。将CTXⅢ基因插入酵母pPIC9K分泌型表达载体重组表达,N端带有3个氨基酸(GYT)残基的重组CTXⅢ(rCTXⅢ)分泌量达9.5mg/L,经一步凝胶过滤纯化,其纯度达90%以上,纯化率达65%。经细胞毒性实验检测,纯化的rCTXⅢ12h的IC50为4.66μg/ml,证实重组蛋白具有良好的生物学活性。