空肠弯曲菌共同抗原基因文库的建立与基因克隆

摘要

从鸡源空肠弯曲菌中提取共同抗原成分 ,用 SDS-PAGE和 Western blot进行分析。结果表明 ,抗空肠弯曲菌共同抗原的单克隆抗体 4 A7可与共同抗原中 62 0 0 0的蛋白带发生特异免疫反应。为获得编码这种蛋白的特异基因 ,从空肠弯曲菌中提取和纯化染色体基因组 DNA,用 Eco R 和 Hind 双酶切 ,从酶切产物的琼脂糖电泳中回收 1～ 2 kb的 DNA片段 ,与用相同酶切的 p Bluescript KS( +)质粒进行重组连接 ,共挑选出 4 2 0个插入外源片段大小较为适中的重组子 ,从而初步建立了可能含有编码空肠弯曲菌共同抗原 62 0 0 0蛋白成分基因片段的重组质粒基因文库。从该文库中用双酶切获取扩增的插入外源基因片段 ,与双酶切的p ET2 8a( +)质粒进行连接 ,转化受体菌后 ,以 IPTG诱导表达 ,用 4 A7单抗作探针进行免疫筛选 ,共筛选出 6个可与该单抗发生特异反应的阳性克隆。