硫酸软骨素蛋白多糖Versican V2-小干扰RNA表达载体的构建及鉴定

摘要

目的构建硫酸软骨素蛋白多糖Versican V-2小干扰RNA(SiRNA)的表达载体,转染大鼠神经干细胞,并从基因表达水平验证其抑制效果。方法利用专门软件,设计针对Versican V2 mRNA序列的特异性SiRNA插入序列,体外合成该序列后将其定向克隆入真核表达载体pRNAT-H1.1/Neo,用电穿孔法将Versican V2-SiRNA表达载体转至大鼠神经干细胞中,并以表达载体中带有的绿色荧光蛋白(GFP)的表达作为转染效率的评价指标,利用反转录-聚合酶链反应鉴定Versican V2-SiRNA对Versican V2基因表达的抑制效果。结果构建的干扰表达载体转染大鼠神经干细胞后可特异性抑制该细胞中内源性Versican V2的表达,而优化的转染条件使转染效率及转染后的细胞特性及活力均能满足下一步研究的需要。结论该干扰表达载体的成功构建,以及转染后在大鼠神经干细胞中抑制功能的有效发挥,为日后开展Versican V2在神经干细胞中表达的功能研究奠定了基础。