预防性添加胰蛋白酶抑制剂对成年猪胰岛分离的影响

摘要

目的　开发成年猪胰岛分离方法。方法　取成年猪胰体尾部,胰管内注入0.1%冷胶原酶(type Ⅺ)消化液, 在38.5 ℃水箱中消化后,放入4 ℃Hanks液中分离并用600μm的滤过网过滤。残留的组织重新悬浮在冷Hanks液中,并放入Ricordi’s chamber内振荡5 min后再次过滤。胰岛分离分为对照组(n=14)、Pefabloc(胰蛋白酶抑制剂)组(n=8)及FOY(胰蛋白酶抑制剂)组(n=5)。Pefabloc组和FOY组消化液中分别添加1.0 mmol/LPefabloc或FOY。结果　Pefabloc组及FOY组的胰岛收获量分别为(11 848±3 530) 个/g 和(14 496±3 693)个/g,明显高于对照组的(8 505±3 349) 个/g,P<0.05。消化后的消化液胰蛋白酶活性对照组为(114.7±50.0)BAEEU,明显高于胰管内注入前的(4. 0±1. 8) BAEEU 及Pefabloc 组的(5. 5±2. 7) BAEEU(P<0. 01),但Pefabloc组与胰管内注入前却差异无统计学意义。对照组胰岛收获量≥8 000 个/g组的胰蛋白酶活性明显低于收获量<8 000 个/g组的活性〔(78.3±26.7) BAEEU vs (137.5±48.4) BAEEU〕,P<0.05。对照组、Pefabloc组及FOY组纯化后的胰岛对不同浓度葡萄糖显示了良好的胰岛素分泌能力。结论　本实验采用的胰岛分离方法能够获得大量的猪胰岛细胞,而且预防性添加胰蛋白酶抑制剂后进一步稳定地提高了胰岛收获?