转抗菌肽基因辣椒蛋白质检测技术研究

摘要

以转抗菌肽BD基因辣椒为材料 ,研究建立转基因食品中外源目的蛋白的检测技术 ,并建立对其忠实表达状况和安全性进行评价的模式。以柞蚕蛹免疫血淋巴作为标准 ,对照检测转抗菌肽辣椒目的蛋白表达的忠实性 ,采用针对转基因食品技术特点而预先设计的技术路线进行分析检测。研究和检测步骤为 :目的蛋白经粗提 ,达到初步纯化。再用两次CM Sepharose FF离子交换柱层析进行中度纯化。纯化产物通过测定抗菌活性、电泳及生物自显影、质谱进行鉴定。系统的检测结果表明 ,以抗菌肽目的基因构建的重组体在导入辣椒后 ,所表达的外源目的蛋白与对照标准蛋白的理化性质、抗菌活性、分子量一致 ,说明在该转基因辣椒中抗菌肽目的基因的表达是忠实的 ,与期望值相符。本研究建立了目的蛋白抗菌肽D的分离纯化及鉴定技术 ,建立了转基因辣椒外源目的蛋白的鉴定方法。