肿瘤转移抑制基因nm23-H1在人肺癌细胞的表达及其检测

摘要

目的:选择已分离鉴定的人巨细胞肺癌细胞高转移亚型PGBE1,转染肿瘤转移抑制基因nm23-H1,以获得稳定表达nm23-H1基因的人肺癌细胞株。方法:采用亚克隆方法获得pcDNA3.1(-)/nm23-H1真核表达载体并进行双酶切和测序鉴定;应用脂质体转染法将重组质粒转染PGBE1细胞;用G418筛选获得阳性细胞克隆,命名为pcDNA3.1(-)/nm23-H1-PGBE1细胞株;用RT-PCR法半定量检测nm23-H1基因的mRNA表达水平和免疫组化法检测nm23-H1基因的蛋白质表达。结果:真核表达载体pcDNA3.1(-)中正确插入了具有完整阅读框的nm23-H1基因;倒置显微镜下观察到经G418筛选出的稳定转染的PGBE1细胞,形成“小岛”;RT-PCR和免疫组化显示转染的细胞中nm23-H1mRNA和蛋白质水平表达均增高。结论:建立了稳定表达nm23-H1基因的PGBE1转染细胞株,可用于进一步研究肿瘤转移的分子机制。