腺病毒介导hIGF-1基因转染对软骨细胞增殖的影响

摘要

目的:探讨腺病毒介导人胰岛素样生长因子(human insulin-like growth factor,hIGF-1)基因转染对软骨细胞增殖的影响。方法:构建携带hIGF-1基因的重组腺病毒并进行PCR、Western blot鉴定。体外培养人胚胎软骨细胞,用处于对数增长期的第3代软骨细胞进行实验。分别转染1、10、100及500不同感染复数单位(multiplicity of infection,MOI)的Ad／hIGF-1,用PBS做阴性对照,hIGF-1生长因子(100μg／L)做阳性对照,采用四氮甲基唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测不同时间、不同组别软骨细胞吸光度。结果:第2代重组腺病毒上清液中PCR鉴定含有hIGF-1基因,Western blot证实Ad／hIGF-1表达成熟的hIGF-1生长因子。不同病毒滴度转染对软骨细胞增殖的影响存在量效依赖关系,100 MOI软骨细胞吸光度约为对照组3倍,1 MOI与10MOI、500MOI对软骨细胞增殖的影响近似;PBS组随着细胞体外培养时间延长,细胞增殖下降,hIGF-1生长因子、hIGF-1基因对软骨细胞增殖的影响存在时效关系,72 h达到峰值。结论:Ad／hIGF-1基因转染对软骨细胞增殖的影响存在量效、时效依赖关系。