磁珠细胞分选CD 133^+/CD 44^+前列腺癌干细胞的初步鉴定

摘要

目的:通过磁珠细胞分选(magnetic bead cell sorting,MACS)方法从人前列腺癌细胞系PC-3中分选CD133+/CD44+干细胞,为进一步功能性研究奠定基础。方法:运用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测MACS分选前后PC-3细胞膜上CD133和CD44表达情况;观察无血清培养成球情况,免疫荧光(immunofluorescence,IF)表达情况;比较细胞在分选前后的形态学、增殖能力方面的差异;免疫组化(immunohistochemistry,IHC)和Western blot检测诱导分化前后前列腺酸性磷酸酶(prostatic acid phos-phatase,PAP)蛋白情况。结果:FCM检测PC-3细胞CD133和CD44的阳性表达分别是(1.33±0.05)%和(0.87±0.06)%,而MACS分选后PAP分别为(84.82±0.07)%和(99.91±0.03)%;IF检测CD133+/CD44+细胞培养后继续呈阳性表达;CD133+/CD44+细胞增殖能力高于PC-3细胞(t=11.0,P=0.008)以及高于诱导后的CD133+/CD44+细胞(t=40.1,P=0.001);CD133+/CD44+细胞经过转化生长因子-β诱导后IHC和Western blot检测PAP表达呈阳性,而未诱导的CD133+/CD44+细胞表达呈阴性。结论:MACS从PC-3细胞株中分选的CD133+/CD44+细胞经过初步功能性鉴定具有干细胞的某些特性,可为前列腺癌干细胞的进一步探索充当铺垫。