ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶的真核表达及鉴定

摘要

目的:构建ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶真核表达载体,并在293T细胞(人胚肾细胞)中实现表达。方法:通过RT-PCR法扩增得到ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat1,构建重组真核表达载体pCMV-Myc-fat1,用脂质体法转染293T细胞,Western blot检测fat1的表达,并用间接免疫荧光(IFA)确定其在293T细胞中的定位情况。结果:构建真核表达质粒pCMV-Myc-fat1,转染293T细胞后,可检测到细胞内有fat1的表达并确定其在细胞中的位置。结论:成功构建真核表达质粒pCMV-Myc-fat1,可检测出细胞内有fat1的表达并确定其在细胞膜和细胞质内均有表达,为进行fat1的功能研究奠定了基础。