猫视神经慢性损伤相关差异表达基因消减cDNA文库的构建

摘要

目的:构建猫视神经慢性损伤相关差异表达基因消减cDNA文库。方法:15只成年家猫随机分为正常对照组、视神经压迫4周组和视神经压迫8周组(n=5),压迫4周组和压迫8周组猫利用球囊植入法建立慢性视神经损伤模型。取各组动物视神经,TRIzol法提取总RNA.SMART技术合成cDNA,随后利用抑制消减杂交方法分离受压4周和8周视神经中差异表达基因的cDNA片段,将其与T载体进行T/A连接构建文库,将连接产物用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选。随机挑取300个白色克隆进行菌落PCR鉴定。结果:菌落PCR扩增显示每个文库80%的克隆中均有200～800 bp的插入片段。结论:成功构建猫视神经慢性损伤相关差异表达基因消减cDNA文库,为进一步筛选、克隆慢性视神经损伤相关差异表达基因奠定了基础。