一种新的非病毒基因转移载体及其体外细胞转染活性研究

摘要

目的 :用低分子量的聚乙亚胺 (PEI)有效地进行基因转染 ,为基因转染在基因治疗中的应用提供一种可靠、廉价、高效的方法。方法 :将带有绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因的真核表达质粒与阳离子聚合物聚乙亚胺 (PEI)结合 ,用肝癌细胞系SMMC772 1实验 ,研究PEI分子量与转染活性以及可能引起的细胞毒性之间的关系 ;进一步研究在血清存在的情况下 ,PEG(聚乙二醇 80 0 0 )、叶酸等物质对PEI介导的转染效率的影响。结果 :分子量为 6 0 0Da的PEI在pH值为 6 0时与质粒DNA以 1∶1的质量比混合 ,细胞转染效率最高为 4 3 6 + - 7 3% ,随着分子量的增大 ,转染活性略有下降 ;进一步研究发现 ,在血清存在下 ,2 0 μM的叶酸和 15 %的PEG能有效地改善PEI介导的转染活性 ,使其转染活性提高了 13% ;用光学相差显微镜检测了PEI潜在的细胞毒性 ,结果发现分子量为 6 0 0Da的PEI没有使细胞形态改变或死亡 ,但是随着分子量的增大 ,PEI潜在的细胞毒性也相应增大。结论 :PEI是一种高效、有用的非病毒载体 ,能够在培养的哺乳动物细胞中进行基因转移 ,这对疾病的基因治疗具有潜在的应用价值。