趋化因子新变异体MPIF-1β重组蛋白的纯化和活性分析

摘要

目的　为深入研究趋化因子新变异体MPIF 1β的结构与功能 ,利用pKPL3a MPIF 1β表达质粒进行原核表达、纯化工艺研究及活性检测。方法　MPIF 1β重组蛋白以包涵体形式存在 ,占总菌体蛋白的 15 % ,工程菌经超声破碎 ,包涵体洗涤 ,变性、复性、肝素SepharoseCL 6B亲和层析 ,CMSepharoseFastFlow和SephacrylS 2 0 0层析分离获得目的蛋白。结果　还原SDS PAGE分析相对分子质量 15 0 0 0u ,纯度 99.0 % ,纯化倍数 6 .6倍 ,总回收率 9.0 7%。体外生物学活性检测证明MPIF 1β重组蛋白对小鼠骨髓集落形成具有抑制作用 ,对U937细胞具有趋化活性 ,且呈一定的剂量依赖关系。结论　建立了简便可行的MPIF 1β重组蛋白纯化路线 ,初步证明了MPIF