组成型天冬氨酸转氨酶基因工程菌的构建与高效表达

摘要

天冬氨酸转氨酶AspAT是苯丙酮酸转氨制备L-苯丙氨酸的关键酶.本研究将大肠杆菌中天冬氨酸转氨酶基因aspC克隆到3种不同质粒中,构建组成型表达质粒pUC/P-aspC,pSE/P-aspC,pET/P-aspC,并分别转化至6种常用的大肠杆菌宿主中.通过对18种重组子的生长及产酶情况的分析,比较了各种重组子生长压力、质粒稳定性与表达酶活的关系,并经SDS-PAGE电泳分析AspAT的表达量,筛选出高产AspAT的重组子BL21(pET/P-aspC),以该工程菌发酵液直接作为酶液,以天冬氨酸和苯丙酮酸(20g/L)为底物,发酵液与底物以1:3的体积比转化生成L-苯丙氨酸16.2g/L,转化率高达80.1%.该体系表达无需诱导,转化无需添加辅酶PLP,展现了良好的产业化前景.