α_1-抗胰蛋白酶活性测定方法及其影响因素的研究

摘要

目的研究用发色底物法测定α1-AT生物活性时，以正常人混合血浆为参考标准的血浆稀释度范围和测定的影响因素。方法采用酶标仪测定抗胰蛋白酶与过量的胰蛋白酶反应后，剩余的胰蛋白酶与BAPNA发色反应的OD值（405nm），观察时间和温度对反应的影响，优化正常人混合血浆（30人份）稀释度范围，建立并验证血浆标准曲线，同时观察几种物质对测定的影响。结果通过优化实验．血浆的稀释倍数在1／50～1／100之间有良好的线性；PEG4000、蔗糖、Tween80／TNBP（S／D）、辛酸钠等对活性测定无明显影响，而枸橼酸钠浓度〉0．125mol／L，α1-AT生物活性测定结果偏高约20％。结论以正常人混合血浆为参考标准品，用酶标仪测定α1-AT的生物活性，快速、准确，方法稳定可靠，α1-AT制备过程中常用的几种物质，除枸橼酸钠外，对其活性测定均无影响。