膜结合型抗大鼠FcεRIα单克隆抗体制备及活性鉴定

摘要

目的:建立抗鼠FcεRI单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),为靶向诱导肥大细胞凋亡创造条件。方法:大鼠嗜碱性粒细胞细胞系RBL-2H3免疫的BALB／c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合,ELISA筛选鼠血清和融合细胞产生的抗体,有限稀释克隆化培养。SDS-PAGE胶电泳、免疫扩散鉴定抗体性质,IgE竞争结合、组胺释放检测抗体生物活性,125I-细胞膜抗体复合物免疫沉淀放射自显影鉴定抗体识别抗原成分。结果:获得2株抗FcεRIα McAb生产细胞株ER-E5.3、ER-C7.4,均为IgG1。培养上清和小鼠腹水获得的抗体效价均大于10-5。流式细胞术分析抗体与RBL-2H3结合率均大于95％,与大鼠胸腺细胞和外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL)无交叉反应,并能竞争性抑制IgE与肥大细胞结合。抗体触发RBL-2H3脱颗粒,组胺释放效应与抗原特异性IgE对肥大细胞的激活效应相同。酶切的Fab片段能与RBL-2H3结合,也能竞争抑制IgE与肥大细胞的结合,但不致RBL-2H3脱颗粒。抗体结合的细胞膜成分为α亚单位。结论:大鼠肥大细胞免疫小鼠与骨髓瘤细胞融合得到2株抗体产生杂交瘤克隆ER-E5.3和ER-C7.4,抗体效价和功能活性达到了实验要求,抗原识别成分为膜FcεRlα。