毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因在大肠杆菌的表达

摘要

根据克隆的毒害艾美耳球虫 (Eimeria necatrix)广东株微线蛋白 - 2基因 (En MIC- 2 (Gd) )的 c DNA序列设计特异性引物 ,用 PCR方法扩增其阅读框架 (ORF)后 ,克隆至质粒表达载体 p ET- 32 a(+) ,成功构建了重组表达质粒 p ET-32 a(+) - En MIC- 2。用 Ca Cl2 法将其转化至宿主细菌 E.coli BL2 1(DE3) ,并用 IPTG成功诱导了 En MIC- 2重组抗原在大肠杆菌表达。表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的 10 .8% ,其相对分子质量约为 5 5 0 0 0。重组蛋白经 SDS- PAGE分析后 ,用 E.necatrix(广东株 )感染鸡的高免血清进行 Western Blotting分析 。