他克莫司滴鼻治疗过敏性哮喘小鼠的实验研究

摘要

目的探讨免疫抑制剂他克莫司(tacrolimus)滴鼻疗法对过敏性哮喘小鼠的治疗效果和机制。方法将24只雌性BALB/c小鼠随机分为4组,分别为阴性对照组(A组)、模型对照组(B组)、低剂量治疗组(C组)和高剂量治疗组(D组)。除A组外,其他各组在第0、7和14天分别用50μg粉尘螨变应原提取液+2 mg氢氧化铝腹腔注射小鼠致敏,A组腹腔注射等量生理盐水。自第28天开始,乙醚麻醉小鼠后,A、B、C和D组分别用100μl生理盐水、PBS、0.01%他克莫司和0.1%他克莫司滴鼻治疗,连续治疗7 d,1次/d,每次治疗同时用50μl(1 mg/ml)粉尘螨变应原滴鼻激发1次。末次激发后24 h,检测小鼠的气道高反应性;末次激发后48 h,处死小鼠,行支气管肺泡灌洗,无菌摘取肺组织和脾脏。记录支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和嗜酸粒细胞数。ELISA法检测BALF和脾细胞培养上清的白介素4(IL-4)、IL-5和γ干扰素(IFN-γ)水平。通过苏木素-伊红染色(HE)和阿尔辛蓝(AB)染色观察小鼠肺部炎症和杯状细胞黏液分泌情况。结果与B组相比,D组气道高反应性显著降低(P<0.05),肺部病理改变(炎症细胞浸润和黏液分泌)明显减轻。D组的BALF中细胞总数[(29.9±5.2)×104/ml](P<0.05)和嗜酸粒细胞数[(4.3±0.8)×104/ml](P<0.01)均比B组[分别为(59.3±6.0)×104/ml和(22.7±5.7)×104/ml]显著减少。D组BALF中IL-4[(22.49±4.96)pg/ml](P<0.05)、IL-5[(43.90±13.15)pg/ml](P<0.01)和IFN-γ[(10.17±1.09)pg/ml](P<0.05)均显著低于B组[分别为(57.02±7.38)、(133.49±15.63)和(15.32±3.23)pg/ml]。D组的脾细胞培养上清中IL-4[(22.54±4.58)pg/ml]、IL-5[(36.31±20.85)pg/ml]和IFN-γ[(11.28±1.79)pg/ml]亦显著低于B组[分别为(56.34±6.21)、(72.32±6.23)和(18.82±1.88)pg/ml](均P<0.05)。整个实验中,C组与B组均无明显差异。结论他克莫司对粉尘螨致敏小鼠具有一定免疫治疗作用,可能与其抑制T淋巴细胞因子分泌有关。