腺病毒介导的HSV-TK/GCV自杀基因治疗前列腺癌的体外实验

摘要

目的以恶性肿瘤无限增殖特性为靶点,应用人端粒酶逆转录酶启动子(hTERT)和小鼠巨细胞病毒启动子(CMV)调控携带HSV-TK基因的减毒非增殖型腺病毒,通过体外实验观察HSV-TK/GCV自杀基因疗法对前列腺癌细胞LNCaP,PC-3和人正常成纤维细胞MRC-5的治疗效果,对其抗肿瘤机制进行初步探讨。方法将腺病毒转染细胞后,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况,通过细胞病理效应(CPE)、细胞活力实验(MTT)和电泳法检测Ad-hTERT-HSV/TK选择性杀伤肿瘤细胞。结果Ad-hTERT-EGFP仅能转染肿瘤细胞,而Ad-CMV-EGFP对正常和肿瘤细胞都能转染。细胞病理效应(CPE)发现Ad-hTERT-HSV/TK对肿瘤细胞具有很强的杀伤能力,而对正常细胞无明显杀伤作用。细胞活力实验(MTT)量化地反映出Ad-hTERT-HSV/TK选择性杀伤肿瘤细胞。电泳法检测到,在表达HSV/TK的肿瘤细胞出现细胞凋亡。结论本实验利用由hTERT启动子调控EGFP报告基因的腺病毒,证明了腺病毒的转染效果及重组病毒Ad-hTERT-HSV/TK具有选择性肿瘤细胞杀伤能力。