hTERT启动子调控腺病毒介导的HSV-tk／GCV基因系统治疗前列腺癌的实验研究

摘要

目的探讨人端粒酶逆转录酶启动子（hTERT）驱动的重组腺病毒Ad-hTERT-HSV-tk结合环氧鸟苷（GCV）对人前列腺癌的治疗作用。方法①体外实验:用携带启动子hTERT的重组腺病毒Ad-hTERT-EGFP以及携带小鼠巨细胞病毒（CMV）启动子的重组腺病毒Ad-CMV-EGFP分别感染人前列腺癌细胞LNCaP及人正常成纤维细胞MRC-5,根据报告基因EGFP表达的不同计算病毒的细胞转染率。MTT法评估GCV对分别感染Ad-hTERT-EGFP、Ad-CMV-EGFP、Ad-hTERT- HSV-tk和Ad-CMV-HSV-tk的MRC-5细胞及LNCaP细胞的杀伤作用。②体内实验:建立人前列腺癌BALB/C裸鼠移植瘤模型,将成瘤裸鼠按随机表法分为4组,每组10只。A组为治疗组,肿瘤局部注射1.0×109 PFU/ml的Ad-hTERT-HSV-tk病毒上清0.1 ml,第1、5、10天各1次,第2～15天腹腔注射GCV 100 mg·kg-1·d-1;B组为Ad-hTERT-HSV-tk对照组,注射Ad-hTERT-HSV-tk同A组,第2～15天腹腔注射PBS;C组为GCV对照组,肿瘤局部仅注射PBS 0.1 ml。第1、5、10天各1次,注射GCV同A组;D组为阴性对照组。比较各组肿瘤体积、瘤重及肿瘤抑制率。结果①体外实验:当感染复数（MOI）=10时,Ad-CMV-EGFP在MRC-5及LNCaP中的转染率分别为88.41%及90.23%,二者比较差异无统计学意义（P＞0.05）,而Ad-hTERT-EGFP在MRC-5及LNCaP中的转染率分别为0及66.67%,二者比较差异有统计学意义（P＜0.01）。MOI=100,GCV=1000μg/ml时,Ad-hTERT-EGFP、Ad-CMV-EGFP、Ad-hTERT-HSV-tk和Ad-CMV-HSV-tk对MRC-5细胞的抑制率分别为0、0、1.1%和98.4%,对LNCaP细胞的抑制率分别为0、0、97.4%和99.4%。②体内实验:荷瘤裸鼠治疗后第14天,A、B、C和D组肿瘤体积分别为82.56、132.85、135.03和174.07 mm3;各组移植瘤重量分别为（0.49±0.22）、（1.17±0.18）、（1.35±0.19）和（1.46±0.13）g;A组的肿瘤体积和重量明显小于其它组（P＜0.01）。第21天时,各组的移植瘤抑制率分别为72.55%、2.49%、12.28%和0,A组的移植瘤抑制率明显大于其它组（P＜0.01）。结论Ad-hTERT-HSV-tk对LNCaP细胞具有靶向杀伤作用,对MRC-5无明显杀伤作用;Ad-hTERT-HSV-tk/GCV系统对人前列腺癌裸鼠移植瘤模型具有明确的治疗作用。