噬菌体T7溶菌酶及其融合蛋白在大肠杆菌中的表达

摘要

以噬菌体Ｔ７ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增Ｔ７溶菌酶基因，插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ载体中，ＤＮＡ序列分析表明，克隆的Ｔ７溶菌酶基因和已报道的序列无氨基酸水平上的差异。将Ｔ７溶菌酶基因分别拼接在烟草病原相关蛋白（ＰＲ１ｂ）信号肽编码序列的３’末端和马铃薯卷叶病毒外壳蛋白（ＰＬＲＶＣＰ）基因靠近３’末端处，构建成两个融合蛋白基因。将Ｔ７溶菌酶及其融合蛋白基因插入大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２１，蛋白电泳及溶菌实验表明，Ｔ７溶菌酶基因在大肠杆菌中高效表达，其产物的表达量占菌体可溶性蛋白的２０％以上，ＰＬＲＶＣＰ的表达量并没有因Ｃ端融合Ｔ７溶菌酶而提高，高等植物的信号肽在大肠杆菌中也能起分泌信号作用。