重组日本血吸虫特异性IgE相关蛋白的纯化及免疫学活性鉴定

摘要

目的　纯化重组日本血吸虫特异性IgE抗体相关蛋白和鉴定其免疫原性。　方法　大量表达Sj43B/pGEX 6p 1 /BL2 1重组克隆菌 ,超声粉碎后离心获得融合表达的重组蛋白包涵体。经TNMFX缓冲液分步洗涤后 ,将包涵体溶解液经FPLC分离 ,获得重组融合蛋白组分 ,再经巯基二硫键转换复性后 ,用于免疫小鼠获得抗血清 ,分别用dot ELISA法和Westernblotting法对融合蛋白引起的特异性血清抗体同型反应进行鉴定。　 结果　分步洗涤可有效去除重组蛋白包涵体沉淀中混杂的多数杂蛋白成分 ,FPLC分离可获得高纯度重组蛋白。用复性后的重组融合蛋白免疫小鼠 ,其中目的蛋白可引起特异性IgE抗体反应 ,而担体蛋白 2 6kDaGST不引起特异性IgE应答 ,可引起特异性IgG抗体反应 ,目的蛋白则否。　结论　重组质粒Sj43B/pGEX 6p 1表达的融合蛋白 ,其目的蛋白部分免疫小鼠可产生特异性IgE抗体。