水稻Osε-cop1基因的原核表达及多克隆抗体制备

摘要

ε-COP蛋白是真核生物分泌途径中COPⅠ有被小泡的一个亚基。本研究利用PCR技术扩增水稻ε-cop基因(Osε-cop1)的ORF(开放阅读框),并克隆到原核表达载体pET-23d上,将表达载体pET-Osε-cop1转入大肠杆菌BL21(DE3),以1.0mmol/L的IPTG(isopropyl β-D-thiogalactoside)诱导表达重组蛋白,然后以重组蛋白作为抗原免疫家兔,制备多克隆抗体。SDS-PAGE电泳分析结果表明,成功诱导表达了分子量约为35kD的重组蛋白,Western blot检测表明,免疫家兔的抗血清与水稻幼穗总蛋白杂交信号较好。Osε-COP1抗体的制备有助于研究该基因及COPI小泡在水稻中的功能。