微紫青霉CBHⅠ基因(Cbh1)在体外无细胞系统中的表达

摘要

以含Ｃｂｈ１的ｐＵＣ１８－１８１ ＤＮＡ 为模板，经ＰＣＲ扩增得到带有Ｔ７启动子的Ｃｂｈ１片段，随后在缺乏糖基化的兔网织红细胞裂解液中得到成功表达，表达量为２１．７ μｇ／ｍ ｌ．得到的ＣＢＨ Ⅰ虽未经糖基化修饰，却可水解对硝基酚－β－Ｄ－纤维二糖苷（ｐＮＰＣ），对ｐＮＰＣ的ＫＭ 和Ｖｍ ａｘ分别为０．８２ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ和０．０６７ μｍ ｏｌ·ｍ ｉｎ－ １·μｇ－ １，但对羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ－Ｎａ）无酶活力．这表明，糖基化修饰可能不影响胞外纤维素酶的活力．