RNA干扰对比观察HIF1α和HIF2α在人肾癌细胞中的作用及机制

摘要

目的:运用RNA干扰(RNAi)方法对比观察HIF1α和HIF2α在人肾癌细胞的作用并探讨相关机制。方法:分别将化学合成的HIF-1α和HIF-2α小片段寡核苷酸脂质体瞬时转染人肾癌细胞(A498),人正常肾小管上皮细胞(HK-2)和A498分别加入培养基和脂质体作为对照组。用RT-PCR或免疫印迹等观察RNAi 24 h后一些基因如VEGF、ET-1、bcl-2和Ki67的改变,并用流式细胞仪和荧光显微镜观察细胞的凋亡情况。结果:与HK-2相比,A498高表达HIF-1α和HIF-2α,RNAi后两基因基本被沉寂。HIF-1α干扰后ET-1、bcl-2和Ki67均下调,伴随凋亡或坏死细胞增多,而HIF2α干扰后,仅VEGF下调较为明显。结论:HIF-1α和HIF-2α均有一定程度调节血管生成基因的作用,但HIF-1α尚具备一定的调节肿瘤细胞增殖功能,可能通过调节凋亡抑制基因实现。提示HIF-1α和HIF-2α可能存在不同的转录调控功能和基因结合位点。