Survivin反义寡核苷酸树形分子载体的构建及其对肝癌细胞凋亡的影响

摘要

目的:研究聚酰胺(polyamidoamine,PAMAM)树形分子高聚合物作为survivin反义寡核苷酸(survivin antisense oligodeoxynucleotide,survivin-asODN)载体传递系统的可行性以及对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响。方法:将200μg/Lsurvivin-asODN和3.66μg/L PAMAM混合制备PAMAM反义基因复合物,同时制备阳离子脂质体反义基因复合物作为对照。透射电镜观察复合物的形态、粒径,Zeta电位分析仪测定复合物的zeta电位,离心法和紫外分光光度仪测定复合物的包封率、载药率和体外DNA释放速度。将上述两种基因载体复合物转染肝癌SMMC-7721细胞,测定其转染效率;Western blotting检测转染后肿瘤细胞中survivin蛋白的表达;流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡率。结果:成功制备PAMAM反义基因载体系统PAMAM-survivin-asODN。该复合物的粒径小于脂质体-survivin-asODN复合物的粒径[(64.9±9.60)vs(193.9±32.20)nm,P<0.01],但zeta电位高于后者[(37.7±3.80)vs(22.6±2.20)mV,P<0.05];两者基因载药率、包封率无显著差异;PAMAM反义基因复合物对DNA持续释放达14 d,但脂质体复合物只持续5 d。PAMAM-survivin-asODN转染肝癌细胞的效果强于脂质体-survivin-asODN(P<0.05)。转染后肝癌细胞siurvivin蛋白的表达显著低于脂质体复合物[(26.80±5.65)vs(36.96±5.89),P<0.05],该细胞的凋亡率显著高于脂质体复合物转染细胞[(60.3±8.25)%vs(48.7±9.39)%,P<0.05]。结论:PAMAM作为载体系统能将survivin-asODN高效递送到肝癌SMMC-7221细胞,诱导人肝癌细胞的凋亡。