户尘螨Ⅱ类变应原Der p2 T细胞表位融合基因的克隆和原核表达

摘要

目的 原核表达、纯化户尘螨（Dermatophagoides pteronyssinus）主要变应原Der p2的T细胞表位融合肽。 方法 将已报道的户尘螨Der p2中编码4个T细胞表位（T1-T4）的核苷酸序列以T1-T2-T3-T4的方式连接，人工合成为嵌合基因，命名为Der p2 T。PCR扩增目的基因Der p2 T，将纯化的扩增片段克隆至pET-28a（＋）载体，构建原核重组表达质粒pET-28a（＋）-Der p2 T，并进行双酶切验证。大量诱导表达含pET-28a（＋）-Der p2 T的E. coli BL-21菌株，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，经Ni-NTA亲和层析获得纯化重组蛋白，并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）分析。ELISA法检测重组Der p2 T细胞表位融合肽对户尘螨过敏患者血清IgE抗体的结合能力。 结果 双酶切结果表明，构建了原核重组表达质粒pET-28a（＋）-Der p2 T。SDS-PAGE分析结果显示，获得相对分子质量（Mr）为10 000的重组Der p2 T细胞表位融合肽。Western blotting分析结果显示，纯化了Der p2的T细胞表位融合肽。Der p2 T细胞表位融合肽对粉尘螨哮喘患者的血清IgE结合能力［（37.70±9.89）μg/ml］较Der p2显著降低［（85.89±9.63）μg/ml］（P＜0.01）。 结论 制备Der p2 T细胞表位融合肽。与Der p2相比，重组Der p2 T细胞表位融合肽对户尘螨过敏患者血清IgE抗体的结合能力明显降低。