尘螨变应原Der p 2基因克隆及原核表达

摘要

目的原核表达尘螨主要变应原Der p 2。方法分离屋尘螨总RNA,根据GenBank已公布的Der p 2核酸序列设计引物用RT-PCR扩增Der p 2编码基因,克隆至pMD19-T载体、亚克隆至表达载体pET28a(+),将表达质粒转化至Escherichia coli BL21(DE3)并用IPTG诱导表达,并对表达产物进行免疫印迹鉴定。结果成功构建了表达质粒pET28a(+)-Derp2,SDS-PAGE和Western blotting显示原核表达获得成功。序列分析表明所获得的Der p 2编码基因与参考序列同源性达99.54%,推测其编码氨基酸130个,相对分子质量约为14348.5。结论尘螨变应原Der p 2原核表达获得成功,为进一步生产重组变应原奠定了基础。